Famokarana sy famaritana biosimika ny holatra oyster laccase NRC 620 ary fanombanana ny fahombiazany amin'ny fanadiovana ranom-paoma.

Rehefa avy notehirizina nandritra ny 25 andro tamin'ny 28°C, ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC620 no naneho ny asa ambony indrindra tao amin'ny tontolo fambolena holatra. Ny pH sy ny mari-pana tsara indrindra ho an'ity anzima ity dia 3.0 sy 70°C tsirairay avy. Rehefa avy notehirizina nandritra ny 2 ora tamin'ny 40°C sy 50°C, dia nitazona 68.33% sy 59.61% ny asan'ny anzima. Rehefa avy notehirizina nandritra ny 2 ora tao amin'ny citrate-phosphate buffer (pH 7.0), dia nijanona tamin'ny 100% ny asan'ny anzima. Ny fanampiana 10 mM MgSO₄ sy CuSO₄ dia nampitombo ny asan'ny anzima teo amin'ny 21% sy 35% teo ho eo, raha nanakana ny asan'ny anzima kosa ny NaCl, MnCl₂, KCl, ary CaCl₂. Amin'ny fampiasana ABTS ho toy ny substrate, ny masontsivana kinetika (Km sy Vmax) an'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase dia 1.99 mM sy 16,217 μmol min−1 L−1. Ny fitsaboana anzima ny santionan'ny ranom-paoma dia nampihena be ny pH sy ny viscosity, ary io fihenana io dia mifandray amin'ny fitomboan'ny fotoana fitahirizana. Ny fitsaboana laccase dia niafara tamin'ny fihenana kely teo amin'ny votoatin'ny phenolic manontolo tao amin'ny ranom-paoma, saingy tsy nisy fihenan'ny asan'ny antioxidant hita.
Tato anatin'ny taona vitsivitsy, nifantoka tamin'ny fampiharana ny bioteknolojia maitso eo amin'ny indostrian'ny sakafo ireo mpikaroka. Ny Laccase dia iray amin'ireo anzima mahasoa indrindra eo amin'ny indostrian'ny sakafo, izay hita fa ampiasaina amin'ny sehatra toy ny fanodinana ranom-boankazo, ny fanaova-mofo, ny fanamafisana ny divay, ary ny fanatsarana ny toetra organoleptika amin'ny vokatra sakafo.¹Maro amin'ireo zavamaniry ambony kokoa sy zavamiaina bitika no mamoaka laccase,²ary ny holatra toy ny deuteromycetes, ascomycetes, ary basidiomycetes dia afaka mamokatra laccase ihany koa.³Ny Laccase (EC 1.10.3.2) dia oksidazy manga izay mampihena ny oksizenina molekiola ho rano amin'ny alàlan'ny rafitra misy atôma varahina telo samihafa, ka mahatonga ny oksidasiona amin'ny akora fenolika sy amina aromatika isan-karazany. Mandritra ny famokarana ranom-boankazo sy legioma, ny fandokoana volontany anzima sy tsy anzima dia olana lehibe.⁴Koa satria misy fiantraikany ratsy amin'ny loko, ny tsiro ary ny hanitra ao amin'ny ranom-boankazo ireo akora ireo, dia tsy maintsy esorina izy ireo.⁵
Amin'ny voankazo rehetra, ny paoma no be mpihinana indrindra eran-tany sy ao amin'ny Vondrona Eoropeana. Tamin'ny taona 2019, ny famokarana paoma dia laharana fahatelo manerantany, mihoatra ny 87 tapitrisa taonina.⁶Mirakitra singa fenolika maro ny paoma, anisan'izany ny flavonoida sy asidra fenolika toy ny asidra kafeika sy asidra klorogenika.⁷Satria mazàna madio ny ranom-paoma dia eo amin'ny 50% ka hatramin'ny 90% eo ho eo amin'ireo singa fenolika no very mandritra ny dingan'ny sivana.⁸Amin'izao fotoana izao, ny mpanjifa dia mirona hisafidy vokatra tsy dia voahodina loatra, toy ny ranom-paoma misy loko polyphenol betsaka. Na izany aza, noho ny habetsahan'ny phenol ao aminy, ity karazana ranom-paoma ity dia mora mivadika ho mainty sy mihombo.⁹Teknolojia isan-karazany, anisan'izany ny fomba fitsaboana amin'ny hafanana toy ny pasteurization amin'ny 60–90°C, no ampiasaina mba hampihenana na hisorohana ny fahamaizin'ny ranom-paoma.¹⁰Na izany aza, araka ny fikarohana nataon'i Sauceda-Gálvez¹¹, ny fanodinana amin'ny hafanana dia mety hanimba ireo akora simika miempo ary hisy fiantraikany amin'ny toetra organoleptika amin'ny ranom-paoma. Ny fomba hafa ankoatra ny fanodinana amin'ny hafanana dia ahitana gazy karbonika supercritical, taratra ultraviolet, ultrasound, tsindry hydrostatic avo lenta, na homogenization amin'ny tsindry avo lenta.¹²Miankina amin'ny masontsivana ampiasaina sy ny toetran'ny vokatra ny fahombiazan'ireo teknolojia ireo sy ny vokatra azo avy amin'ny ranom-boankazo mety. Voafetra ny fampiasana azy ireo noho ny vidiny lafo, ny fiantraikany ratsy amin'ny kalitaon'ny vokatra sakafo sasany, na ny tsy fahampian'ny fanafoanana ny anzima.^13,14
Azo ampiasaina hanamarinana sy hanadiovana ny ranom-boankazo ny Laccase.¹⁵Gökmen et al.¹⁶Manoro hevitra ny fampiasana laccase ho an'ny fanadiovana ranom-boankazo satria manala tsara ireo akora phenolic amin'ny alàlan'ny fanovana azy ireo ho polymers na oligomers izay mora esorina amin'ny alàlan'ny membrane ultrafiltration, ahafahan'ny ranom-paoma mitazona loko sy fahazavana maharitra mandritra ny enina herinandro amin'ny 50°C. Ny laccase *Trichoderma* voadio dia tsy mihetsika amin'ny vakana alumina ary ampiasaina hanesorana ireo akora tsy mahafinaritra vokatry ny loto mikraoba amin'ny ranom-paoma.¹⁷
Eo amin'ny 80-90% eo ho eo amin'ireo singa miendrika ester sy aldehydes no singa miendrika ester sy aldehydes, izay manome hanitra miavaka ho an'ny ranom-paoma.¹⁸Napetraka teo ambony fanohanana tsy lafo vidy vita amin'ny kofehy voajanahary avy amin'ny akoran'ny voanio tanora ny lakcase avy amin'ny *Trametes versicolor* mba hanadiovana ny ranom-paoma.¹⁹Ireo fanadihadiana teo aloha dia nandinika ny fanamafisana ny ranom-paoma (loko sy ny fahalotoana) tamin'ny fampiasana fomba tsy misy anzima na fomba tsy ahafahana mihetsika, na miaraka amin'ny ultrafiltration.^5,19Na izany aza, mbola tsy mazava ny fiantraikan'ny laccase holatra amin'ny toetra fizikokimia amin'ny ranom-paoma mandritra ny fitahirizana. Noho izany, ny tanjon'ity fanadihadiana ity dia ny handinihana amin'ny alalan'ny fanandramana ny fiovan'ny toetra fizikokimia, ny votoatin'ny fitambarana fenolika, ary ny fiasan'ny antioxidant amin'ny ranom-paoma aorian'ny fitsaboana amin'ny laccase holatra sy ny fitahirizana ao anaty vata fampangatsiahana mandritra ny roa herinandro. Ny laccase dia manana fahafahana manova ny fitambarana fenolika, izay mahatonga azy ireo ho azo ampiasaina amin'ny dingana indostrialy isan-karazany, anisan'izany ny fanadiovana ny ranom-boankazo. Ity fanadihadiana ity dia nandinika ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620, nifantoka tamin'ny fepetra tsara indrindra ho an'ny asany sy ny fahombiazany amin'ny fanadiovana ny ranom-boankazo. Na dia mbola voafetra aza ny fikarohana momba ny holatra oyster (P. ostreatus NRC 620), ny fanadihadiana teo aloha dia nandinika ny anzima avy amin'ny loharano holatra isan-karazany, toy ny Trametes versicolor sy Ganoderma lucidum. Ny tanjon'ity fanadihadiana ity dia ny hanombana ny mety ho fampiharana ity anzima ity amin'ny indostrian'ny sakafo ary hanasongadina ny toetrany miavaka, indrindra ny pH sy ny mari-pana mety aminy.
Novidina avy any Sigma-Aldrich (Kanada) ny 2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS). Ny reagents hafa rehetra dia manana kalitao analytika.
Nahazo ny karazana holatra oyster fantatra NRC620 ny Foibe Fanangonana Kolontsaina Bibikely ao amin'ny Foibe Fikarohana Nasionaly. Taorian'ny fambolena kely, ity karazana ity dia notehirizina tao anaty fitoeran-javatra agar dextrose ovy amin'ny mari-pana 4°C. Toy izao ny fomba fanomanana ny inoculum: Ny mycelium 10 andro izay efa lehibe tanteraka dia natsofoka tao anaty takelaka agar dextrose ovy ary notehirizina tamin'ny mari-pana 28°C. Rehefa afaka 10 andro, dia nesorina tao anaty media agar ny sakana mycelium telo mirefy 12 mm ny savaivony tamin'ny fampiasana totohondry metaly sterile ary napetraka tao anaty tavoara Erlenmeyer 250 mL misy plug landihazo misy media kolontsaina sterilized 50 mL (pH 5.0, araka ny nohazavain'i Othman et al. teo aloha.²⁰). Notehirizina tamin'ny mari-pana 28°C nandritra ny 18 andro ireo kolontsaina. Avy eo dia notantavanina tamin'ny alalan'ny taratasy sivana Whatman No. 1 ireo kolontsaina, ary ny ranoka azo avy amin'izany no loharanon'ny anzima.
Ny fiasan'ny Laccase dia nojerena tamin'ny fampiasana ABTS ho toy ny substrate. Ny fangaroan'ny fihetsiketsehana (2 mL) dia nahitana 500 μL an'ny ABTS 0.3 mM (levona ao anaty buffer sodium citrate 0.1 M, pH 4.5) sy ny habetsahan'ny santionan'ny anzima ilaina izay nafangaro tamin'ny rano voadio.^21,22Raha jerena fa afaka manao oksidasiona ny ABTS amin'ny mari-pana ao an-trano (28 °C ± 2) ny laccase, dia voafaritra ny oksidasiona ABTS tamin'ny fandrefesana ny fitomboan'ny absorbance amin'ny 420 nm (ε₄₂₀= 36.000 sm^-1 M ^-1) amin'ny fampiasana spektrofotometatra UV Agilent Carry-100. Ilaina ny singa iray amin'ny fiasan'ny laccase mba hahazoana oksidana 1 μmol ABTS isa-minitra. Ny fifantohan'ny proteinina dia voafaritra tamin'ny fomba Bradford tamin'ny fampiasana albuminina serum bovine ho fanaraha-maso anatiny.^23,24
Rehefa avy nahazoana ny anzima avy amin'ny karazana holatra oyster NRC 620, dia norefesina tamin'ny elanelam-potoana samihafa nandritra ny 25 andro ny asany teo ambanin'ny fepetra tsy miovaova tamin'ny 28 °C.
Mba handinihana ny fiantraikan'ny mari-pana amin'ny asan'ny laccase, dia nisy andrana natao tamin'ny mari-pana eo anelanelan'ny 20 sy 90 °C. Talohan'ny nanampiana ny anzima sy nanombohana ny fihetsika, dia afangaro ny buffer (0.1 M sodium citrate, pH 4.5) sy ny substrate (ABTS) ary notehirizina nandritra ny 5 minitra tamin'ny mari-pana samihafa. Notombanana tamin'ny alalan'ny incubation tao anaty buffer phosphate 0.05 M sodium (pH 7.0) tamin'ny 40, 50, 60, ary 70 °C nandritra ny 2 ora ny fahamarinan'ny hafanan'ny anzima. Avy eo dia notombanana tamin'ny fampiasana ny substrate ABTS ny asa sisa tavela.
Notombanana tamin'ny fampiasana ABTS ho toy ny substrate ao anaty buffer citrate-phosphate 0.1 M miaraka amin'ny pH eo anelanelan'ny 2.5 sy 7.0 ny fiantraikan'ny pH amin'ny asan'ny laccase. Notehirizina tamin'ny 40°C nandritra ny adiny roa tao anaty buffer citrate sy Tris 0.1 M (pH 3, 4, 6, ary 7) ny vahaolana anzima mba hanombanana ny fahamarinan'ny pH. Nokajiana taorian'ny incubation ny asa sisa tavela amin'ny ABTS ho toy ny substrate.
Notehirizina nandritra ny 10 minitra tao anaty buffer phosphate sodium (0.05 M, pH 7.0) misy ion metaly isan-karazany (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ary Mn2+) tamin'ny fifantohana 2.5 mM sy 10 mM ny laccase. Avy eo dia nampiana ny substrate (ABTS) mba hanombohana ny fihetsika, ary nojerena ny asa mifandraika amin'izany.
Ny oksidasiona ABTS amin'ny alalan'ny laccase amin'ny fifantohana samihafa (0.025–3 mM) dia norefesina tamin'ny pH 4.5 mba hamaritana ny masontsivana kinetika (Vmax sy Km). Ny kinetika^{tsy miovaova}Ny kajy nataon'ny equation Michaelis-Menten dia nokajiana tamin'ny fampiasana ny Lineweaver-Burk plot, izay mampiseho ny mifamadika amin'ny tahan'ny fihetsehana ho toy ny fiasan'ny fifantohana substrate. Ny kinetic constants dia nokajiana avy amin'ny Lineweaver-Burk plot mampiasa ny rindrambaiko GraphPad Prism version 6.01.
Rehefa avy nosasana tsara tamin'ny rano fisotro madio ireo paoma, dia notapatapahina roa ary nosotroina tamin'ny alalan'ny milina mpamoaka ranom-paoma Braun MP80 mandeha ho azy tanteraka (vita any Alemaina). Notantavanina tamin'ny lamba famaohana misy sosona efatra ny ranom-paoma. Tsy nisy anzima nampiana tao amin'ny vondrona fanaraha-maso, raha nampiana 2.0% laccase (ny fifantohana mahomby indrindra nosedraina) kosa ny ranom-paoma vao avy nomanina, izay notehirizina tamin'ny 4°C nandritra ny roa herinandro.
Ny asidra azo titratable (TA) sy ny pH dia voafaritra araka ny fomba fiasan'i Boulton et al.^al.27Ny pH-n'ny santionany tsirairay dia norefesina tamin'ny fampiasana metatra pH nomerika (JENWAY 3510 pH meter). Ny asidra azo titratable (TA) dia nokajiana mifototra amin'ny asidra malika amin'ny fampiasana ity raikipohy manaraka ity.
Izay V sy C dia ny volume (mL) sy ny fifantohana (0.1 mol/L) an'ny vahaolana sodium hydroxide ampiasaina amin'ny titration. K dia ny coefficient fiovam-po asidra malic, mitovy amin'ny 0.067, ary W dia ny lanjan'ny ranom-paoma (g).
Ny akora mety levona rehetra (^TDS) ny votoatin'ny santionan'ny ranom-boankazo rehetra dia voafaritra tamin'ny fampiasana refractometer paosy PAL-1 (ATAGO, Tokyo, Japon). Taorian'ny fandrefesana tsirairay, dia nosasana tamin'ny rano deionized ny family optika, ary notsapaina intelo ny santionan'ny ranom-paoma tsirairay. Ny sandan'ny santionany tsirairay dia nokajiana tamin'ny alàlan'ny salan'isa tamin'ireo fandrefesana telo. Ny salan'isa ± fivilian-dàlana mahazatra ho an'ny santionan'ny ranom-paoma tsirairay dia nokajiana ihany koa tamin'ny alàlan'ny salan'isa tamin'ireo valiny ireo.
Notombanana tamin'ny alalan'ny viscometer mihodina (RV, Rheotest 2, Alemaina) ny viscoelasticité-n'ireo santionan'ny ranom-paoma. Napetraka tao anatin'ny varingarina "S2" an'ny viscometer ny santionany. Ny viscosity hita maso dia asehon'ny fiolahana eo amin'ny fiolahana eo amin'ny shear stress sy ny shear rate, izay nokajiana avy amin'ny shear stress sy ireo fiolahana mifanaraka amin'izany amin'ny shear rate samihafa (manomboka amin'ny 1.00 ka hatramin'ny 437.4 s⁻¹). Toy izao manaraka izao ny raikipohy fikajiana ny viscosity hita maso:
Izay η ny viscosity miharihary (cP), τ ny fihenjanana amin'ny fihenjanana (dyn/cm²), γ ny tahan'ny fihenjanana (sec⁻¹), ary ny (τ) dia kajy amin'ny fampiasana ny sandan'ny torque (α) sy ny cylinder (Z) amin'ny fampiasana ity raikipohy manaraka ity: τ = Z. α.
Ny mari-pamantarana ny volontany dia voafaritra araka ny fomba Meidav ​​​​et^al.29Notsindronina tamin'ny "centrifuge" tamin'ny 2750 xg nandritra ny 10 minitra ny santionan'ny ranom-boankazo 10 ml. Nafangaro tamin'ny etanôla 95% 5 ml ny ranon-javatra 5 ml. Norefesina tamin'ny 420 nm ny fidiran'ny rano tao amin'ilay fangaro tamin'ny fampiasana spektrofotometatra Shimadzu UV (UV-1601 PC).
Ny votoatin'ny phenolic manontolo (TPC) dia voafaritra tamin'ny alalan'ny loko mampiasa ny reagent Folin-Ciocalteu araka ny voalazan'i Boulton et al.^[27]Nisy fiolahana mahazatra momba ny asidra gallika namboarina ho an'ny fifantohana manomboka amin'ny 0 ka hatramin'ny 500 mg/L (^r²= 0.997). Ny valiny dia aseho amin'ny asidra gallika mitovy (mg GAE/mL).
Ampio rano voadio 125 μL sy vahaolana FRAP 2850 μL amin'ny ranom-paoma 25 μL ary avelao ao anaty haizina mandritra ny³⁰min. Avy eo dia refeso ny absorbance amin'ny 593 nm amin'ny fampiasana spectrophotometer Shimadzu UV (UV-1601 PC). Ny reagent FRAP dia nomanina tamin'ny fampifangaroana buffer acetate 300 mM (pH 3.6), klôro vy (III) 20 mM, ary 10 mM 2,4,6-tris (2-pyridyl)triazine (TPTZ) (levona ao anaty HCl 40 mM) amin'ny tahan'ny 10:1:1. Noforonina ny fiolahana mahazatra tamin'ny fampiasana Trolox ho fenitra (^R²= 0.999), ary ny valiny dia aseho amin'ny μM Trolox/mL.
Ny fiasan'ny antioxidantan'ireo ranom-boankazo notsaboina sy tsy notsaboina dia voafaritra tamin'ny fampiasana ny fomba DPPH mba hanombanana ny fahafahany manala ireo radika afaka DPPH.³¹Nafangaro tamin'ny vahaolana DPPH 1 ml (100 μM) tao anaty methanol ny ranom-boankazo folo mikrolita. Rehefa avy nafangaro tao anaty haizina nandritra ny 30 minitra, dia norefesina tamin'ny 517 nm ny fidiran'ny rano tao anaty fangaro tamin'ny fampiasana spectrophotometer Shimadzu UV (UV-1601 PC). Ny valiny dia naseho ho toy ny trolox equivalents (μM trolox/ml) mifototra amin'ny fiolahana calibration (_^R2= 0.990).
Ny angon-drakitra azo dia naneho fa ny famokarana laccase ambony indrindra dia hita tao amin'ny holatra oyster NRC 620 tamin'ny faran'ny andro faha-18 nanaovana fermentation, nahatratra 1302 U/L ny asa. Izany no fototra hamaritana ny fotoana fambolena tsara indrindra ho an'ny famokarana laccase (Sary 1). Na dia nitombo aza ny famokarana anzima niaraka tamin'ny fitomboan'ny fotoana fambolena, dia tsy mifandraika mivantana amin'ny fotoana fambolena ny tahan'ny fitomboana; rehefa afaka 21 andro, dia nitombo 90 U/L monja ny asan'ny anzima (hatramin'ny 1390 U/L). Noho izany, ny 18 andro no nofidiana ho fotoana fambolena tsara indrindra mba handanjalanjana ny vokatra azo amin'ny tombontsoa ara-toekarena azo avy amin'ny fitomboan'ny fotoana fambolena.
Fiantraikan'ny fotoana fambolena amin'ny vokatra laccase ao amin'ny Pleurotus ostreatus NRC 620. Natsofoka tao anaty ranoka sterile 50 ml ny sakana mycelium holatra telo (12 mm) ary avy eo dia novolena tamin'ny 28 °C nandritra ny fotoana samihafa.
Mifanaraka amin'ny fanadihadiana hafa, ny valin'ny fikarohanay dia manondro fa ny vanim-potoana tsara indrindra amin'ny fambolena mba hahazoana ny famoahana laccase ambony indrindra avy amin'ny holatra dia mety ho eo anelanelan'ny 7 sy 36 andro.³²Araka ny voalazan'i Ezike et al.³³, *Trametes polyzona* WRF03 no namokatra laccase betsaka indrindra tamin'ny faran'ny andro fahasivy nanaovana fermentation, miaraka amin'ny proteinina 1637 U/mg miasa manokana. Ankoatra izany, Othman et al.³⁴Hitan'ny mpikaroka fa namoaka laccase be dia be ny *Trichoderma harzianum* S7113 tamin'ny andro fahadimy nanaovana ny fambolena. Nahatratra ny fara tampony ny tahan'ny famokarana laccase tamin'ny andro fahefatra ambin'ny folo ary avy eo dia nihena tsikelikely.³⁴Na dia mety hitranga mandritra ny dingana lehibe amin'ny fitomboana aza ny famoahana anzima, dia mazàna izy io no mahatratra ny fara tampony mandritra ny dingana antonony ary ateraky ny fihinanana loharanon-karbônina na azota.^34,35
Na dia naneho hetsika avo lenta aza ny laccase avy amin'ny Pleurotus ostreatus NRC 620 nandritra ny mari-pana midadasika manomboka amin'ny 50°C ka hatramin'ny 80°C, ary nanakaiky ny fara tampony (69–98%), dia hita tamin'ny 70°C ny asany ambony indrindra (Sary 2a). Tany ivelan'io mari-pana io, dia nihena teo amin'ny 70°C teo ho eo ny asan'ny anzima. Ireo valiny ireo dia manondro fa miasa amin'ny mari-pana avo ny anzima, angamba satria ny mari-pana avo dia mampitombo ny angovo kinetika amin'ny fihetsika.
Fiantraikan'ny mari-pana (a) sy ny pH (b) amin'ny asan'ny laccase ao amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Ny mari-pana manomboka amin'ny 20 ka hatramin'ny 90 °C dia tratra tamin'ny alalan'ny fampidirana mialoha ny fangaro amin'ny mari-pana samihafa mandritra ny 5 minitra alohan'ny hanampiana ny anzima sy hanombohana ny fihetsiketsehana. Ny fiantraikan'ny pH amin'ny asan'ny laccase dia notombanana tamin'ny fampiasana ABTS ho toy ny substrate ao anaty vahaolana misy 0.1 M citrate-phosphate buffer amin'ny pH 2.5 ka hatramin'ny 7.0.
Araka ny voalazan'i Ezike et al.^al.33, ny mari-pana tsara indrindra ho an'ny *Trametes polyzona* WRF03 laccase dia 55 °C, izay mitovy amin'ny an'ny *Ganoderma lucidum*^laccase36ary mitovy amin'ny mari-pana tsara indrindra (50 °C) ho an'ny *Trametes polyzona* KU-RNW02737^laccase . ^Baldrian38manamarika fa, toy ny amin'ny rafitra anzima hafa manimba lignin, ny mari-pana tsara indrindra ho an'ny laccase dia eo anelanelan'ny 50 sy 70 °C.
Ny valiny dia naneho fa ny anzima no naneho ny asa ambony indrindra tamin'ny pH 3.0, nahatratra 94% ny asa tamin'ny pH 3.5. Na izany aza, dia nijanona ho mavitrika tamin'ny pH midadasika manomboka amin'ny 2.5 ka hatramin'ny 7.0 izy (Sary 2b). Ankoatra izany, dia naneho asa ambony kokoa tamin'ny toe-javatra asidra raha oharina amin'ny toe-javatra tsy miandany na alkaline. Nijanona farafahakeliny 77% ny asany raha oharina amin'ny pH manomboka amin'ny 2.5 ka hatramin'ny 4.5, saingy nahatratra 38% eo ho eo ihany tamin'ny pH 7.0. Ny pH tsara indrindra ho an'ny laccase avy amin'ny *Trametes polyzona* WRF03 dia 4.533, izay mitovy amin'ny pH ho an'ny laccase avy amin'ny *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, ary *Trametes hirsuta* 41. Na izany aza, araka ny fanadihadiana nataon'i Chairin et al.⁴², ny pH tsara indrindra ho an'ny laccase avy amin'ny *Polymorpha f. sp.* WR710-1 dia 2.2, raha toa kosa ny pH tsara indrindra ho an'ny laccase avy amin'ny *Polymorpha f. sp.* IBL-04 dia 5.043. Ny fifamatoran'ny anion hydroxide (mpanohitra ny laccase) amin'ny atôma varahina ao amin'ny laccase T2/T3 dia mety ho antony mahatonga ny fihenan'ny asan'ny laccase amin'ny toe-javatra pH tsy miandany na alkaline. Mety hanakorontana ny famindrana elektrôna anatiny avy amin'ny foibe T1 mankany amin'ny foibe T2/T3 izany, ka noho izany^mametrany asan'ny anzima23,44
Tamin'ny alalan'ny fampidirana ny anzima tamin'ny mari-pana samihafa, dia hita fa samy nisy fiantraikany tamin'ny fahamarinan'ny anzima ny fotoana fampidirana sy ny mari-pana. Tsara homarihina fa ny laccase avy amin'ny *Trametes polyzona* NRC 620 dia naneho fahamarinan-toerana ambony kokoa tamin'ny 40℃ sy 50℃, nitazona 68.33% sy 59.61% tamin'ny asany voalohany, tsirairay avy, rehefa afaka 120 minitra (Sary 3a). Mifanohitra amin'izany kosa, tamin'ny toe-javatra mitovy (40℃ sy 50℃, 120 minitra), ny laccase avy amin'ny *Trametes polyzona* WRF03 dia nitazona 64.38% sy 42.92% tamin'ny asany tsirairay avy.³³Mifanohitra amin'izany kosa, ny fitomboan'ny fotoana sy ny mari-pana ao amin'ny incubation dia nampihena ny fahamarinan'ny *Trametes polyzona* NRC 620 laccase; Rehefa avy incubation tamin'ny 60℃ sy 70℃ nandritra ny 60 minitra, dia nihena ho 39.24% sy 1.72% ny asany (Sary 3a). Mifanaraka amin'ny valin'ny andrana, ny laccase avy amin'ny *Trametes polyzona* WRF03 dia naneho fahamarinan-toerana ambony kokoa tamin'ny 40 sy 50℃ nandritra ny dingana fitsaboana mafana.³³Toy izany koa, Lueangjaroenkit et^al.37ary Chairin et^al.42nitatitra ny fahamarinan'ny laccases avy amin'ny Trametes polyzona KURNW027 sy Trametes polyzona WR710-1 amin'ny 50 °C mandritra ny 1 ora. Amin'ny maha-biocatalyst mahasoa azo ampiharina amin'ny sehatra bioteknolojia isan-karazany azy, ny laccase dia tokony hanana fahamarinan-toerana sy fahombiazana tsara amin'ny mari-pana midadasika.
Fahamarinan'ny hafanana (a) sy ny fahamarinan'ny pH (b) an'ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Notombanana ny fahamarinan'ny hafanana tamin'ny alalan'ny fampidirana ny vahaolana anzima tao anaty buffer phosphate sodium 0.05 M (pH 7.0) tamin'ny 40, 50, 60, ary 70 °C nandritra ny 2 ora. Notombanana ny fahamarinan'ny pH tamin'ny alalan'ny fampidirana ny vahaolana anzima tao anaty buffer citrate 0.1 M sy buffer Tris (pH 3, 4, 6, ary 7) tamin'ny 40 °C nandritra ny 2 ora. Nokajiana tamin'ny fampiasana ABTS ho toy ny substrate ny asa sisa tavela taorian'ny fampidirana.
Mba hamaritana ny fepetra tsara indrindra hampiasana sy hitehirizana anzima, dia nodinihinay ny fiantraikan'ny pH amin'ny fahamarinan'ny laccase. Ny fiparitahan'ny sandan'ny pH samihafa dia nisy fiantraikany lehibe tamin'ny fahamarinan'ny rafitry ny proteinina, ka nisy fiantraikany tamin'ny fahamarinan'ny molekiolan'ny anzima sy ny asan'izy ireo. Ny valiny dia naneho fa tsy dia marin-toerana loatra ny anzima amin'ny toe-javatra asidra, raha toa kosa ka naneho fahamarinan-toerana tsara kokoa tamin'ny sandan'ny pH ambony kokoa (faritra tsy miandany sy alkaline). Tamin'ny sandan'ny pH 7.0, 6.0, 4.0, ary 3.0, ny tahan'ny fitazonana anzima taorian'ny 120 minitra dia teo amin'ny 100%, 62.54%, 52.39%, ary 11.14% teo ho eo (Sary 3b). Ny laccase *Strombus multisus* WRF03 dia naneho fahamarinan-toerana ambony kokoa tamin'ny sandan'ny pH tsy miandany (5.5–6.5) ary fahamarinan-toerana ambany kokoa tamin'ny sandan'ny pH asidra (latsaky ny 4.0). Rehefa afaka 120 minitra tamin'ny pH 5.5, 6.0, ary 6.5, dia teo amin'ny 82%, 100%, ary 93% teo ho eo ny tahan'ny fitazonana anzima.³³Khairin et al.⁴²nanamarika fa ny laccase avy amin'ny Trametes polyzona WR710-1 dia marin-toerana ao anatin'ny pH eo anelanelan'ny 6.0 sy 7.0, raha i Sayed et al.⁴⁵nampiseho fa marin-toerana kokoa ny laccase amin'ny toe-javatra pH tsy miandany. Na izany aza, ny laccase avy amin'ny Cerrena unicolor dia naneho fahamarinan-toerana ihany koa tamin'ny toe-javatra alkaline (pH 9.0)⁴⁶Ireo laccases nodinihina dia nampiseho fahamarinan-toerana avo lenta tamin'ny pH midadasika. Mety ho toetra manan-danja amin'ny fampiharana indostrialy izany.
Koa satria misy iôna metaly sasany izay sady mandrisika no manakana ny fiasan'ny anzima, dia tsy maintsy dinihina amin'ny fampiharana indostrialy ny fiantraikan'izy ireo amin'ny fiasan'ny anzima. Zava-dehibe izany satria ny iôna metaly dia loto mahazatra eo amin'ny tontolo iainana izay mety hisy fiantraikany amin'ny fahamarinan-toerana sy ny fananganana anzima ivelan'ny sela.⁴⁷Mba handinihana ny fiantraikan'ny iôna metaly maromaro amin'ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620, dia nanao andrana mifandraika amin'izany izahay. Araka ny aseho amin'ny Sary 4, arakaraka ny karazana metaly ampiasaina, ny fampitomboana ny fifantohana iôna metaly avy amin'ny 2.5 mM ka hatramin'ny 10 mM dia nisy fiantraikany ratsy tamin'ny asan'ny anzima. Ohatra,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺, ary^Cu²⁺afaka mandrisika sy mampandeha ny asan'ny anzima, raha^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺, ary^K⁺mety hanakana ny fiasan'ny anzima. Amin'ny fifantohana 10 mM, ny ion Cu²⁺ sy Mg²⁺ no mpikatroka mahery vaika indrindra amin'ny asan'ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620, izay manome ambaratonga fampahavitrihana eo amin'ny 34% sy 20% eo ho eo. Na izany aza, amin'ny fifantohana 10 mM, ny ion Ca²⁺ no mpanakana mahery vaika indrindra amin'ny laccase, izay mampihena ny asan'ny anzima eo amin'ny 60% eo ho eo.
Ny fiantraikan'ny iôna metaly amin'ny asan'ny Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase. Notehirizina nandritra ny 10 minitra tao anaty buffer phosphate sodium (0.05 M, pH 7.0) misy iôna metaly isan-karazany amin'ny fifantohana 2.5 mM sy 10 mM ny laccase. Avy eo dia natomboka tamin'ny fanampiana ny substrate (ABTS) ny fihetsika, ary avy eo dia norefesina ny asa mifandraika amin'izany.
Mifanaraka amin'ny an'ireo mpanoratra hafa izay nahita fa ny Mg²⁺ sy Cu²⁺ dia mampitombo ny asan'ny *Trametes polyzona* WRF03³. Hitan'i Castaño et al.⁴⁸ fa ny laccase avy amin'ny *Xylaria* sp. dia amporisihina amin'ny ampahany sasany amin'ny alalan'ny ion varahina (Cu²⁺). Ankoatra izany, i Foroutanfar et al.⁴⁹ sy Si et al.⁵⁰ dia nanao fanadihadiana mitovy amin'izany momba ny laccase avy amin'ny *Paraconiothyrium variabile* sy *Trametes pubescens*. Ny toerana fifamatoran'ny varahina karazana II (T2) an'ity anzima ity dia azo tototry ny Cu²⁺ amin'ny fifantohana iray, izay mety hanazava ny fanentanana ny asan'ny laccase amin'ny fifantohana Cu²⁺³⁹ ambony kokoa. Koa satria oksidazy misy atôma varahina maromaro ny laccase holatra lo fotsy, dia isan-karazany ny fiantraikan'ny iôna varahina amin'ny asan'ny laccase ary miovaova manomboka amin'ny famporisihana sy fanakanana ka hatramin'ny tsy miandany.⁵¹ Mifanohitra amin'izany, Zhou et al.^[52]nitatitra fa^Cu²⁺nanakana ny fiasan'ny laccase an'ny vitsika an-dranomasin'i Taiwan (Odontotermes formosanus). Na izany aza, ny laccase an'ny Cerena sp. HYB07^[53]ary Clitocybe maxima^[54]tsy voakasiky ny ion varahina.
Ny maha-specificity ny substrate dia asehon'ny masontsivana kinetika (Km sy Vmax); arakaraka ny maha-matanjaka ny fifandraisan'ny substrate amin'ny anzima no maha-ambany ny sandan'ny Km ary maha-ambony ny maha-specificity ny substrate.^3,21,55Ny masontsivana kinetika (Km sy Vmax) an'ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dia voafaritra tamin'ny fampiasana ny rindrambaiko GraphPad Prism 6.0 tamin'ny alalan'ny fanaovana ny sary Lineweaver-Burk (Sary 5). Rehefa nampiasa ABTS ho toy ny substrate, ny vokatra dia 1.99 mM sy 16217 μmol.^{min⁻¹ L⁻¹,}tsirairay avy. Elsayed et al.²¹nitatitra fa ny sandan'ny Km ho an'ny oksidasiona ABTS dia 0.1 mM sy 0.064 mM, tsirairay avy, izay manondro ny fifandraisana avo lenta eo amin'ny isoenzyme Lac A sy Lac B amin'ny ABTS. Ankoatra izany, ny sandan'ny Vmax dia 0.182 μmol^min⁻¹ary 0.603 μmol^min⁻¹, tsirairay avy. Ambany noho ny an'ny Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) ny sandan'ny Km azo; ankoatra izany, ny sandan'ny Vmax (1429 mmol min⁻¹) dia ambany ihany koa^{ambany kokoa}rehefa mampiasa ABTS ho toy ny substrate.33 Toy izany koa, ny sandan'ny Km an'ny Lentinus squarrosulus MR13 sy Trametes sp. AH28-2 laccase dia 0.0714 mM sy 0.025 mM, tsirairay avy, ary ny sandan'ny Vmax dia 0.0091 mM min−1 sy 0.67 mM min−1 mg−1 (raha oharina amin'ny ABTS)^{, tsirairay avy.56,57}
Nodinihina ny fiantraikan'ny fifantohana ABTS amin'ny asan'ny laccase avy amin'ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ary naseho ny tetika Lineweaver-Burk momba ny fifanoheran'ny hafainganam-pandehan'ny fihetsika voalohany mifanohitra amin'ny fifantohana ABTS. Ny fihetsiky ny oksidasiona an'ny ABTS miaraka amin'ny fifantohana samihafa (0.025–3.0 mM) amin'ny laccase dia norefesina tamin'ny pH 4.5 mba hamaritana ny masontsivana kinetika (Vmax sy Km). Ny tsy miovaova kinetika Michaelis-Menten dia nokajiana tamin'ny fampiasana ny tetika Lineweaver-Burk momba ny fifanoheran'ny hafainganam-pandehan'ny fihetsika mifanohitra amin'ny fifantohana substrate. Ny tsy miovaova kinetika dia nokajiana avy amin'ny tetika Lineweaver-Burk mampiasa ny rindrambaiko GraphPad Prism 6.01.
Ireo anzima mpanazava nentim-paharazana, toy ny pektinase, dia manadio ireo akora pektika, mampihena ny viscosity sy ny turbidity. Mandrava tsara ireo polysaccharides ara-drafitra izy ireo ary matetika ampiasaina miaraka amin'ny anzima hafa, toy ny cellulase sy hemicellulase, mba hanatsarana ny vokatra sy ny fahazavana. Na izany aza, ny pektinase dia tsy mikendry manokana ireo singa fenolika, izay mpandray anjara lehibe amin'ny turbidity sy ny oxidative browning, indrindra amin'ny ranom-boankazo toy ny paoma sy ranom-boaloboka.⁵⁸Mifanohitra amin'izany kosa, ny laccases dia mandrisika ny oksidasionan'ny singa fenolika, ka mamadika azy ireo ho molekiola lehibe kokoa sy tsy mety levona izay azo esorina amin'ny alàlan'ny sedimentation na filtration. Ity mekanisma ity dia tsy vitan'ny hoe manatsara ny fahazavana fotsiny fa manitatra ny androm-piainan'ny ranom-boankazo amin'ny alàlan'ny fampihenana ny mety ho volontany oksidativa vokatry ny singa fenolika. Ankoatra izany, ny dingana fanadiovana mifototra amin'ny laccase dia azo tanterahina amin'ny fepetra fanodinana malefaka (pH 3.5–5.5, mari-pana 25–40 °C), ka mahatonga azy ireo ho mety amin'ny ranom-boankazo marefo tsy misy fiantraikany amin'ny toetrany ara-tsakafo na organoleptika.⁵⁹Nasehon'ny fanadihadiana fa afaka manadio ny ranom-boankazo ao anatin'ny 1-2 ora ny fitsaboana pektinase, raha toa kosa ka mitaky fotoana lava kokoa (3-6 ora) ny fitsaboana laccase mba hampihenana tanteraka ny akora fenolika. Na izany aza, ity dingana ity dia azo hatsaraina amin'ny alàlan'ny fampijanonana ny anzima na amin'ny fampifangaroana ny laccase amin'ny fomba fanadiovana mekanika.⁶⁰Ato amin'ity fandalinana ity, ny fandrefesana ny anzima avy amin'ny fitrandrahana manta dia naneho asa laccase sy α-amylase manan-danja, raha toa kosa ka ambany dia ambany ny asa pectinase sy xylanase, ary tsy hita ny asa cellulase. Noho izany, ny fihenan'ny turbidity sy ny votoatin'ny phenolic dia vokatry ny fiasan'ny laccase indrindra, raha toa kosa ny fiovan'ny viscosity dia mety ho vokatry ny fiasan'ny amylase.
Ny Tabilao 1 dia mampiseho ny masontsivana fizikokimia amin'ny ranom-paoma vao nopotserina sy ny santionany notsaboina tamin'ny laccase. Ny valiny dia naneho fa ny vokatra azo avy amin'ny ranom-paoma vao nopotserina (71.59%) dia ambany noho ny an'ny santionany notsaboina tamin'ny laccase (87.34%). Ireo valiny ireo dia mifanaraka amin'ny zavatra hitan'i Pilnik sy Orange.⁶¹, izay nanambara fa ny fampiasana anzima amin'ny fanodinana voankazo dia afaka mampitombo ny vokatra ranom-boankazo, manatsara ny sivana, ary mahazo ranom-boankazo madio sy avo lenta ho an'ny fifantohana. Ny fitomboan'ny vokatra ranom-boankazo dia vokatry ny fitomboan'ny votoatin'ny siramamy mety levona ao amin'ny ranom-boankazo. Mandritra ny hydrolysis anzima amin'ny voankazo, ny mesoglea sy ny pectin ao amin'ny rindrin'ny sela dia potika ary miova ho akora mety levona toy ny siramamy tsy miandany sy asidra.^62.Ambany lavitra noho ny an'ny vondrona fanaraha-maso ny sandan'ny pH-n'ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny anzima (P < 0.05), ary nitombo be ny sandan'ny pH-n'ny vondrona roa tonta nandritra ny fitahirizana (Tabilao 1). Mifanaraka amin'ny an'i Mark et al. ireo valiny ireo.⁶³, izay nanamarika fa nihena ny pH-n'ny ranom-boankazo cashew taorian'ny fitahirizana taorian'ny fitsaboana tamin'ny hafanana. Ny fahasimban'ny pectin sy ny fiforonan'ny asidra galacturonic taorian'ny fitsaboana anzima dia mety ho tompon'andraikitra amin'ny fitomboan'ny pH mandritra ny fitahirizana. Ny pH-n'ny santionany notsaboina tamin'ny anzima dia nijanona teo anelanelan'ny 4.05 sy 4.31 nandritra ny fitahirizana, raha toa kosa ny pH-n'ny ranom-paoma tsy notsaboina dia teo anelanelan'ny 4.12 sy 4.33.
Ny asidra manontolo (TA) an'ny santionany tsy voatsabo sy ny tsy notsaboina tamin'ny laccase dia naneho fironana fihenana niaraka tamin'ny fitomboan'ny fotoana fitahirizana (Tabilao 1). Ny fihenan'ny asidra dia azo lazaina fa vokatry ny fiovan'ny asidra organika ho gliosida na fihetsika anzima, ary koa ny oksidasiona mandritra ny fitahirizana ranom-boankazo.⁶⁴Ambany noho ny an'ny ranom-boankazo hafa (ranom-frezy 0.9%, ranom-plum 2.2%, ranom-kumquat 1.0%, ranom-abriko 2.4%, ranom-boasary 0.8%) ny asidra manontolo amin'ny ranom-boankazo paoma fanaraha-maso sy ny santionany nasiana anzima, saingy mitovy amin'ny an'ny ranom-boankazo hafa (ohatra, ranom-poara 0.3%).⁶²Ireo fahasamihafana eo amin'ny ranom-paoma vao avy nopotserina tsy voatsabo ireo dia mety ho vokatry ny anton-javatra maro toy ny toe-javatra mitombo, ny fototarazo, ny fahamatorana ary ny fomba fanodinana.⁶⁵Ny fihenan'ny asidra manontolo amin'ny ranom-paoma voatsabo amin'ny alalan'ny fanaraha-maso sy ny ranom-paoma voatsabo amin'ny laccase dia mifanaraka amin'ny vokatra natolotry Singh et al.⁶⁶momba ny fihenan'ny asidra manontolo amin'ny ranom-paoma Jin Nuo rehefa afaka 74 andro fitahirizana. Etsy ankilany, Oshmiansky sy Wojdylo⁶⁷tsy nahita fiovana lehibe teo amin'ny asidra ao amin'ny ranom-paoma rehefa nandalina ny vokatry ny fomba fanadiovana nentim-paharazana.
Ny valiny aseho ao amin'ny Tabilao 1 dia manondro fa ny sandan'ny solids mety levona (TSS) amin'ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny laccase dia ambony noho ny an'ny santionany tsy notsaboina. Ireo valiny ireo dia mifanaraka amin'ny fanadihadiana navoaka.^.68Ankoatra izany, ny Tabilao 1 dia mampiseho fa ny sandan'ny TSS an'ny vondrona ranom-paoma fanaraha-maso dia 9.58 tamin'ny fotoana voalohany ary nahatratra 11.05 tamin'ny faran'ny fe-potoana fitahirizana. Ireo sanda ireo dia ambany noho ny sandan'ny TSS an'ny ranom-paoma vaovao notaterin'i Hamid et al.^.69(11.2 sy 11.80, tsirairay avy). Nitombo be ny sandan'ny TSS an'ireo santionan'ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny laccase, nanomboka tamin'ny 11.23 ary nahatratra 12.93 rehefa afaka tapa-bolana nitehirizana tamin'ny 4°C (Tabilao 1). Fitomboana mitovy amin'izany amin'ny TSS nandritra ny fitahirizana ihany koa no hita tamin'ny voankazo citrus, voasarimakirana, ary voasary mamy. Ny fitomboan'ny solids levona tanteraka (TSS) nandritra ny fitahirizana dia mety ho vokatry ny hydrolysis ny polysaccharides (starch) ho monosaccharides (siramamy), ny fitomboan'ny fifantohana noho ny tsy fahampian-drano amin'ny ranom-boankazo, ary ny fahasimban'ny pectin ao amin'ny ranom-boankazo ho solids levona. Ny fitomboan'ny solids levona tanteraka (TSS) dia mety ho vokatry ny fitomboan'ny siramamy levona, izay mety ho niforona tamin'ny fiovan'ny pectin na cellulose ho siramamy levona amin'ny alàlan'ny pectin na cellulase, tsirairay avy, na tamin'ny hydrolysis ny starch ho siramamy, araka ny tatitry Hamed et al.^69.Azo jerena maso ny fiantraikan'ny laccase amin'ny toetran'ny ranom-paoma, satria ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny laccase dia mampiseho fikorianan'ny rano tsara kokoa ary ambany kokoa ny viscosity raha oharina amin'ny ranom-paoma tsy notsaboina. Voarakitra ao amin'ny Tabilao 1 ity fandinihana ity; Ny viscosity an'ny santionany notsaboina tamin'ny anzima dia 1.87 cP, raha 2.95 cP kosa ny viscosity an'ny santionany fanaraha-maso. Io fihenan'ny viscosity io dia mety ho vokatry ny fahafahan'ny akora mitovy amin'ny pectin mitazona rano bebe kokoa sy ny fiforonan'ny rafitra tambajotra mifamatotra.
Ato amin'ity fandalinana ity, ny fiantraikan'ny laccase amin'ny fanondroana volontany (BI) amin'ny ranom-paoma dia nodinihina tamin'ny fandrefesana ny fidiran'ny rano amin'ny 420 nm amin'ny fampiasana spectrophotometer. Aseho ao amin'ny Tabilao 1 ny valiny. Nandritra ny fitahirizana, ny BI amin'ny santionan'ny ranom-paoma amin'ny vondrona notsaboina sy tsy notsaboina dia naneho fironana nitombo tsikelikely. Ny BI dia maneho ny haavon'ny volontany ary afaka ampiasaina ho toy ny^zava-dehibefamantarana ny fihetsehana volontany anzima sy tsy anzima. Nitombo be ny fidiran'ny akora nandritra ny fitahirizana (P < 0.05). Tamin'ny faran'ny fitahirizana, ny_A420Nitombo teo amin'ny 217% sy 121% teo ho eo ny sandan'ny santionan'ny ranom-paoma tao amin'ny vondrona fanaraha-maso sy ireo vondrona nomena anzima (Tabilao 1). Ny valiny dia manondro fa ny fitsaboana anzima dia afaka mampihena tsara ny haavon'ny fandokoana volontany eo amin'ny 56% eo ho eo. Ny valin'ny Bezerra et al.^[19]] dia mifanaraka amin'ny valin'ny fikarohanay; Nampiasa laccase-glutaraldehyde-fibre voanio izy ireo mba hanadiovana ny ranom-paoma, ka nampihena ny lokony tany am-boalohany hatramin'ny 61%.
Na dia manana fiantraikany tsara amin'ny sakafo sy ny fitsaboana eo amin'ny vatan'olombelona aza ny polyphenols ao anaty ranom-boankazo, dia mety hihetsika amin'ny proteinina ihany koa izy ireo, ka hiteraka ranom-boankazo ho toy ny rahona, ho toy ny sedimentation, na ho toy ny ranoka mikorontana, ka manova ny tsiro sy ny hanitra ao amin'ny vokatra ary mampihena ny faharetany.⁷¹Ny tanjon'ity fanadihadiana ity dia ny hampihena soa aman-tsara ny votoatin'ny singa fenolika ao amin'ny ranom-paoma amin'ny fampiasana laccase avy amin'ny Pleurotus ostreatus NRC 620. Ny valiny aseho ao amin'ny Tabilao 1 dia mampiseho fa nihena be ny votoatin'ny singa fenolika manontolo tao amin'ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny laccase talohan'ny fitahirizana tamin'ny 4 °C. Ankoatra izany, nihena ihany koa ny votoatin'ny singa fenolika manontolo nandritra ny fitahirizana tamin'ireo santionany roa nodinihina (Tabilao 1). Fikarohana nataon'i Sandri et al.⁷²nampiseho fa ny ranom-paoma voatsabo amin'ny anzima dia afaka mitazona ny asany antioxidant sy ny votoatin'ny singa phenolic. Na izany aza, ny vokatry ny fanadihadiana nataon'i Lettera et al.⁷³mampiseho fa ny fitsaboana ranom-boasary amin'ny laccase fungal dia afaka mampihena ny votoatin'ny singa phenolic ao anatiny hatramin'ny 45%.
Naseho fa manana toetra toy ny fanesorana ireo radika afaka, fampihenana sy famonoana oksizenina tokana, famindrana atôma hidrôzenina, ary fanomezana elektrôna ho an'ny radika afaka ny fitambaran'ny phenolika, ka mahatonga azy ireo ho antioksidan mahery vaika.⁷⁴Noho izany, ato amin'ity fandalinana ity, dia nampiasaina ny fomba mifototra amin'ny DPPH sy FRAP mba hanombanana ny fiantraikan'ny laccase amin'ny asan'ny antioxidantan'ny ranom-paoma voatahiry ao anaty vata fampangatsiahana mandritra ny 14 andro (Tabilao 2). Samy naneho fitomboan'ny asan'ny antioxidantan'ny fomba roa ireo nandritra ny fitahirizana, izay mety ho vokatry ny fitomboan'ny singa phenolic afaka na ny fiforonan'ny vokatra avy amin'ny fihetsiky ny Maillard (MRP), ary ny vokatra avy amin'ny fihetsiky ny Maillard no mety ho antony mahatonga ny fitomboan'ny asan'ny antioxidantan'ny vokatra.⁷⁵Ny fihetsika volontany tsy misy anzima (anisan'izany ny fahasimban'ny asidra ascorbic, ny fihetsika Maillard, ary ny fahasimban'ny siramamy vokatry ny asidra) dia mamokatra loko volontany (melanoidins). Ny vokatra fahasimban'ny asidra ascorbic antonony sy ny vokatra fahasimban'ny siramamy (toy ny fitambaran'ny carbonyl) dia afaka mihetsika amin'ny asidra amine amin'ny alàlan'ny fihetsika Maillard.⁷⁶Na dia efa nodinihina lalina aza ny fiovaovan'ny lokon'ny voankazo sy legioma ho volontany mandritra ny fitahirizana, dia mbola voafetra ihany ny fahatakarantsika momba ireo fihetsika ireo.⁷⁷Raha ampitahaina amin'ny fomba FRAP, ny ranom-paoma notsaboina tamin'ny laccase dia naneho asa antioxidant ambany kokoa tamin'ny alàlan'ny fomba DPPH (Tabilao 2), ary nitombo be ny asa antioxidant an'ny santionany rehetra niaraka tamin'ny fitomboan'ny fotoana fitahirizana. Fomba roa samihafa hamaritana ny asa antioxidant no nampiasaina tamin'ity fandalinana ity satria tsy mitovy ny foto-kevitr'izy ireo. Ny fomba DPPH dia mandrefy ny fahafahana manafoana ny radika afaka, raha ny fomba FRAP kosa mandrefy ny fahafahana mampihena ny ion vy. Noho izany, asaina mampiasa fomba maro hamaritana ny asa antioxidant mba hahatakarana bebe kokoa ny asa antioxidant an'ny santionany nodinihina.⁷⁸
Ny iray amin'ireo zavatra hita fototra tamin'ity fanadihadiana ity dia ny hoe ny *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 dia mampiseho asa tsara indrindra amin'ny 70°C sy pH 3.0. Raha ampitahaina amin'ny laccase holatra hafa izay matetika ampiasaina amin'ny fanadiovana ranom-boankazo, toy ny *Trametes versicolor* sy *Ganoderma lucidum* laccases, ny *P. ostreatus* NRC 620 dia mampiseho fahamarinan-toerana ara-hafanana ambony kokoa sy pH asidra kokoa. Ny laccase avy amin'ny *Trametes versicolor* sy *Ganoderma lucidum* dia mazàna mampiseho asa tsara indrindra eo amin'ny 50-60°C ary amin'ny sandan'ny pH eo anelanelan'ny 3.5 sy 5.0. Io fahasamihafana io dia mety handray anjara amin'ny fanatsarana ny fahombiazan'ny fanadiovana ranom-boankazo, indrindra ho an'ny ranom-boankazo asidra izay tena ilaina ny fahamarinan-toerana amin'ny sandan'ny pH ambany kokoa. Ny toetra mampiavaka ny *P. Raha ampitahaina amin'ny laccase holatra hafa nodinihina, ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dia mampiseho ny fahafahana miasa tsara amin'ny toe-javatra sarotra kokoa. Ny mari-pana tsara indrindra azony ampiasaina amin'ny indostria dia manondro tombony mety hitranga amin'ny fampiharana indostrialy, toy ny tahan'ny fihetsehana haingana kokoa sy ny fihenan'ny fahalotoan'ny mikraoba. Ny pH ambany ananany, izay mifanaraka tsara amin'ny toetran'ny asidra amin'ny ranom-boankazo maro, dia mety ilaina amin'ny fizotran'ny fanadiovana ranom-boankazo. Ireo valiny ireo dia manamarina ny fikarohana bebe kokoa ho an'ny fampiharana amin'ny ambaratonga lehibe, ka mahatonga ny *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ho safidy azo ampiharina amin'ny loharanon-karena laccase fungal nentim-paharazana. Raha ampitahaina amin'ny fanadihadiana teo aloha, dia hitanay fa ny mari-pana tsara indrindra dia 60°C ary ny pH tsara indrindra dia 3.0. Taorian'ny fihetsehana tamin'ny 60°C nandritra ny 80 minitra, ny *Ganoderma lucidum* laccase dia nitazona.⁴⁶%-n'ny asany.79 Araka an'i Kurniawati sy Nicelle⁸⁰, ny anzima *Ganoderma lucidum* dia mampiseho fahamarinan-toerana tsara dia tsara na antonony amin'ny 25°C sy ny sandan'ny pH manomboka amin'ny 5.0 ka hatramin'ny 8.0, ary ny fahamarinan-toerana amin'ny pH 6.0 sy ny mari-pana manomboka amin'ny 10 ka hatramin'ny 30°C. Ato amin'ity fandalinana ity, dia hitanay fa ny pH sy ny mari-pana tsara indrindra ho an'ny asan'ny anzima ho an'ny *Pleurotus ostreatus* dia 3.0 sy 70°C. Rehefa avy notehirizina tamin'ny 40°C sy 50°C nandritra ny adiny roa, dia nitazona ny 68.33% sy 59.61% amin'ny asany ny anzima. Ankoatra izany, ny Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase dia naneho asa avo lenta tamin'ny mari-pana midadasika manomboka amin'ny 50°C ka hatramin'ny 80°C, saika nahatratra ny asa ambony indrindra (69%–98%), miaraka amin'ny asa ambony indrindra hita tamin'ny 70°C.
Ho famaranana, ny holatra oyster laccase NRC620, izay azo tamin'ny toe-javatra statika, dia naneho asa sy fitoniana tsara indrindra tamin'ny pH sy ny mari-pana isan-karazany, izay naneho fitoniana ambony kokoa raha oharina amin'ny loharanon-kery hafa. Ny fanampiana 10 mM MgSO₄ sy CuSO₄ dia nampitombo ny asan'ny hery fiarovana teo amin'ny 21% sy 35% teo ho eo. Rehefa novaina ho ranom-paoma, dia nampihena ny pH sy ny viscosity ny hery fiarovana, raha nihena kely fotsiny ny votoatin'ny phenolic nandritra ny fitahirizana.
Manamarina ny mety ho vitan'ny laccase eo amin'ny indostrian'ny sakafo ny valiny, indrindra amin'ny fanadiovana zava-pisotro. Amin'ny alàlan'ny fandravana manokana ny singa fenolika, ny laccase dia tsy vitan'ny hoe mampihena ny fahalotoana sy manatsara ny fahazavana fa mitazona ny kalitaon'ny ranom-boankazo ihany koa amin'ny toe-javatra miasa malefaka. Tsy toy ny akora fanadiovana nentim-paharazana toy ny gelatin, bentonite, ary silica gel, ny laccase dia tsy mamorona fako na manala fofona mahafinaritra amin'ny zava-pisotro, ka mahatonga azy io ho safidy sariaka kokoa amin'ny tontolo iainana sy maharitra kokoa. Ankoatra izany, raha ampitahaina amin'ny anzima sy fomba fanivanana hafa, ny laccase dia manolotra vahaolana voafaritra tsara sy mahomby nefa tsy manimba ny kalitaon'ny vokatra.
Kyomuhimbo, HD sy Brink, HG. Fampiharana sy paikady fampijanonana ny lakase misy varahina; famerenana. Heliyon 9, e13156 (2023).